بررسی اثر فاکتور رشد اپیدرمال بر تکوین جنین های ۱۶-۸ سلولی موش و بیان ژن گیرنده این فاکتور پس از انجماد شیشه ای

چکیده زمینه و هدف: انجماد جنین های انسانی یک فعالیت روتین در درمانگاههای درمان ناباروری می باشد. تکوین موفقیت آمیز و لانه گزینی جنین های منجمد شده به میزان زیادی به محیط کشت مناسب، فاکتورهای رشد، سایتوکاینها و بیان ژنومی دارد. مطالعات اخیر بیانگر نقش مهم فاکتور رشد اپیدرمال (egf) و رسپتور آن در تکوین جنین و مراحل لانه گزینی می باشند. هدف از این مطالعه تعیین تأثیر فاکتور رشد اپیدرمال در تکوین قبل از لانه گزینی و بیان رسپتور آن در جنین موش منجمد شده با استفاده از نی کشیده شده می باشد. روش بررسی: جنین های 16-8 سلولی 66 تا 72 ساعت پس از تزریق hcg از موشهای تحریک تخمک گاری شده نژاد nmri بدست آمدند و به 4 گروه (دو گروه شاهد و دو گروه آزمون) تقسیم شدند. جنین های گروه شاهد 1و2 به مدت 96 ساعت در محیط mem-α -و (+egf(10 ng/ml mem-α کشت داده شدند. جنین های گروه آزمون 1 و 2 بلافاصله پس از جمع آوری منجمد شدند و پس از ذوب به ترتیب در دو محیط mem-α و mem-α +egf (10 ng/ml) برای مدت 96 ساعت کشت داده شدند. تکوین جنین ها بطور روزانه ثبت شد. نتایج بدست آمده با استفاده از آزمون بررسی شدند. بررسی بیان ژن گیرنده با روش rt-pcr در جنین های خارج شده و یا در حال خروج از زونا صورت گرفت. به دنبال واکنش rt (ترجمه معکوس) واکنش pcr با استفاده از پرایمرهای nested صورت پذیرفت تا دقت و حساسیت کار افزایش یابد. یافته ها: میزان تشکیل بلاستوسیست و خروج از زونا در جنین های منجمد شده به میزان قابل توجهی کمتر از جنین های غیرمنجمد بود. میزان دژنراسیون در جنین های منجمد شده بوضوح بالاتر بود. مقایسه دو گروه شاهد 1 با 2 و آزمون 1 با 2 بصورت دو به دو نشان داد که میزان تشکیل بلاستوسیست، خروج از زونا و دژنراسیون در بین این گروهها از تفاوت معنی داری برخوردار نیست. بررسی های مولکولی با روش rt-pcr نشان دادند که پس از 96 ساعت کشت جنین ها mrna مربوط به گیرنده فاکتور رشد اپیدرمال در هر 4 گروه شاهد 1و 2، آزمون 1 و 2 بیان می شود. نتیجه گیری: افزودن egf با غلظت 10 ng/ml به یک محیط کشت مانند αmem- هیچگونه تأثیر محرکی بر تکوین جنین های منجمد شد و غیرمنجمد ندارد. انجماد باعث ایجاد وقفه در بیان ژن گیرنده فاکتور رشد پس از 96 ساعت کشت جنین های منجمد شده، نمی شود. کلید واژه ها: جنین قبل از لانه گزینی، انجماد جنین، فاکتور رشد اپیدرمال، بیان ژن. وصول مقاله: 28/9/84 اصلاح نهایی: 15/3/85 پذیرش مقاله: 18/3/85